Высокодисперсные коллоидные системы и меланины чаги

составляет 6,5 г/кг веса животного, при подкожном введении LD

– 0,5 г/кг. Испытывались различные формы препаратов из чаги: жидкий, густой экстракты и порошок. Их токсичность и общее действие изучали на кроликах, кошках и собаках. Индивидуальная переносимость, в зависимости от вида животного к препаратам из чаги, имела существенные различия. Однако, в целом, опыты, поставленные на большом количестве животных, свидетельствовали о том, что эти препараты хорошо ими переносятся.

Токсическое действие препаратов из чаги испытанных на различных видах животных проявлялось у них в виде расстройства движений, а затем паралича. Было установлено, что они действуют угнетающе на центральную нервную систему, а не на периферическую – в области нервно-мышечного синапса, то есть показано их курареподобное действие. Кумулятивные свойства препаратов из чаги исследованы на крысах и кроликах. Крысам ежедневно вводили зондом в желудок препараты чаги в дозе 1 г/кг веса животного в течение пяти месяцев, а кроликам в дозе 0,3 г/кг до шести месяцев. Установлено, что они не обладают кумулятивными свойствами [71], также показано отсутствие у препаратов из чаги пирогенных свойств [72].

Средней лечебной дозой при пероральном применении чаги для человека является 15 мл 2 % раствора три раза в день, что составляет 1 г сухого вещества чаги в сутки (20 мг на 1 кг веса) [1].

Внутривенное и внутримышечное введение препаратов на основе диффузионных соков чаги оказывало более сильное влияние на организм животного. Недостаточная очистка их от балластных веществ, в том числе зольных элементов, приводила к побочным явлениям, таким, как озноб, некроз тканей вокруг места инекционирования, изменения в дыхании и нарушение сердечного ритма [73].

Проведены исследования на животных внутримышечного и внутривенного введения очищенных препаратов из чаги. Для этого были приготовлены образцы из диффузионного сока чаги (при различных способах проведении экстракции) и полифенолоксикарбонового комплекса с различной степенью очистки от балластных примесей и зольных элементов. Наиболее хорошие результаты показали два препарата. Препарат для внутримышечного введения, полученный из диффузионного сока с низкой температурой экстракции (в батарее диффузоров, Т°=30-45 °C), подвергнутый диализу с низкой зольностью 13,5 %, рН=5,4. Другой препарат для внутривенного введения получен на основе полифенолоксикарбонового комплекса, подвергнут диализу с низкой зольностью 12,2 %, рН=7,0. В связи с низкой растворимостью полифенолоксикарбонового комплекса он растворён с использованием хлористого аммония. Первый препарат оказывал благоприятное влияние на сердечную деятельность, повышая сократительную способность миокарда у кролика, кроме того, наблюдался сдвиг дыхания в сторону более спокойного ритма. Второй препарат активировал и восстанавливал жизненные функции нерва, утраченные под влиянием хлористого калия. Авторами сделано заключение о том, что различные способы получения препаратов из чаги видоизменяют их действия на физиологические функции организма животного и функциональные свойства нерва [73].

Внутривенное введение различных по степени очистки препаратов из чаги благоприятно влияло на физиологическую деятельность органов и систем животных, но отличалось по характеру их воздействия на дыхание и сердечную деятельность. Испытанные образцы получены из диффузионного сока с низкой температурой экстракции (в батарее диффузоров, Т°=30-45 °C) путём его сгущения и растворения в бидистилляте, либо выделением полифенолоксикарбонового комплекса и растворением его в натриевой щёлочи. Они имели близкие значения сухого остатка, зольности (20,5 %-27,2 %) и рН. Все образцы снижали ритм дыхательных движений. Те, которые имели наименьшую зольностью не приводили к изменению амплитуды дыхательных движений, а остальные препараты её увеличивали или уменьшали. Все испытанные образцы положительно влияли на работу сердца, способствовали усилению сократительной способности мышц его желудочков. Образец с наименьшей зольностью, подвергнутый диализу уваренный диффузионный сок, показал наилучший результат, поскольку улучшал коронарное кровообращение. Непосредственно диффузионный сок и диффузионный сок, упаренный досуха, а затем растворённый в бидистилляте, несколько укорачивали длительность сердечного цикла. Автором сделан вывод о том, что на деятельность сердца препараты чаги влияют не только через центральную нервную систему, но и гуморальным путём, непосредственно повышая трофику сердечной мышцы [74]. В другом исследовании установлено, что неочищенный препарат из чаги влияет на работу сердца и эффект воздействия зависит от дозы препарата. Низкие концентрации чаги (0,1 %) оказывали благоприятный эффект на работу сердечной мышцы, а концентрация 0,2 % вызывала его остановку [75]. Применение полифенолоксикарбонового комплекса не вызывало возникновения патологических явлений аритмии. Оптимальная его концентрация (0,5-1,0 %) оказывала трофическое действие на сердечную мышцу (увеличивалась мощность работы сердца и амплитуды сокращений), повышался тонус вегетативной иннервации [76]. Внутривенное введение препарата чаги не влияло на частоту ?-волн, изменяло высоту их амплитуды. По мнению автора, это свидетельствует о влиянии препарата на кору больших полушарий головного мозга, при этом изменялся обмен веществ в клетках коры мозга [77].

Выделенные из чаги индивидуальные фракции и вещества, такие, как биоглюканы [78], трипептид с молекулярной массой 365Да [23], показали высокую биологическую активность. Раствор биоглюканов в очень низкой концентрации (0,0001 %) улучшал электровозбудимые свойства мембран клеток сопоставимо с эффектом гипокальциевых растворов, но в отличие от них, положительный хронотропный эффект биоглюканов удлинялся в 50-100 раз. Трипептид эффективно ингибировал процесс агрегации тромбоцитов. Клинические испытания на больных полипозом желудка и язвенной болезнью проводили, применяя препараты чаги перорально [79-82], внутримышечно [83,84] и внутривенно [84,85]. Установлено, что 2 % раствор чаги, принимаемый в количестве 15 мл 3 раза в день, оказывает нормализирующее и, по-видимому, тонизирующее действие на центральную нервную систему больных язвенной болезнью и через неё на весь организм в целом. Кроме 2 % раствора чаги эффективно применение сухих таблеток БИН-чага, обладающих аналогичными лечебными свойствами. Их терапевтическая доза составляла 3-4 таблетки в день [82]. Показано, что внутримышечное введение обеззоленного препарата из чаги, по сравнению с пероральным применением 2 % водной вытяжки чаги, более эффективно для лечения этих заболеваний, однако это было очень болезненно. Кроме того, этот препарат обладал пирогенным действием. Внутривенное введение препарата из чаги оказалось более эффективным по срокам ликвидации язвенной болезни по сравнению с лечением препаратами чаги, применяемыми другими способами, а также другими медикаментозными средствами.

Проведено исследование влияния полифенолоксикарбонового комплекса, осаждённого хлористоводородной кислотой (сухой осаждённый препарат), на организм животных. Введение этого препарата кроликам через зонд в течение 10 дней в дозах 1 г/кг веса не вызывало существенных изменений в весе их тела, составе крови и деятельности сердца. Использование более высоких доз – 5 г/кг веса, для мышей не сопровождалось токсическими явлениями [86].

Проводились клинические испытания применения полифенолоксикарбонового комплекса, осаждённого хлористоводородной кислотой, для лечения гастрита с преобладанием больных с анацидным состоянием и гипопластическими и атрофическими изменениями слизистой желудка. Необходимо отметить, что эти больные отрицательно реагировали на лечение обычным препаратом чаги, что проявлялось в усилени болей в животе и появлении частого жидкого стула. Было показано, что полифенолоксикарбоновый комплекс обладал более мягким действием, по сравнению с не осаждённым препаратом из чаги. У наблюдаемых больных произошло улучшение их общего состояния, а также нормализация электрофизиологических показателей. Этот препарат у больных гастритом и полипозом желудка оказывал стимулирующее влияние на центральную нервную систему и её регуляторные механизмы, которые, вводя компенсаторные реакции, нормализовывали деятельность желудочно-кишечного тракта [77]. Кроме того, приём препарата чаги приводил к нормализации активности в большей степени каталазы крови и в меньшей степени протеазы у больных язвенной болезнью [87].

Имеются данные [88] об успешном лечении запущенных форм псориаза у больных, одновременно страдающих заболеваниями желудочно-кишечного тракта. Через 2-3 месяца непрерывного применения препарата чаги 38 человек выздоровели, а у 8 наблюдалось улучшение состояния.

В ряде работ [89-95] проведено исследование антитоксического, радиопротекторного и адаптогенного действия чаги.

На пекарских дрожжах было показано [89], что препараты из чаги ослабляют токсическое действие фтористого натрия, который является мощным ингибитором ферментов каталазы и эстеразы, катализирующих процесс брожения. Антитоксическое, восстанавливающее действие чаги наблюдали и в процессе прорастания семян пшеницы, протравленных медным купоросом.

В опытах in vivo было показано, что кормление чагой белых мышей приводило к уменьшению дистрофических изменений в печени, вызванных четыреххлористым углеродом [90]. Настой чаги, введенный через зонд в желудок мышам, проявлял антитоксическое действие. Мышам внутрибрюшинно вводили цитостатик этимидин в летальной дозе 30 мг/кг. Наблюдали 65 % выживших животных, получавших чагу, против 5 % в контроле. Установлено, что при добавлении настоя чаги в питье животным подобного эффекта не наблюдалось [91].

В работе [92] показано, что кормление крыс криопрепаратами чаги через 2-3 минуты после внутривенного введения радиоактивного изотопа

Sr способствовало снижению депонирования радионуклида в костной и мягких тканях. Достоверно показано и увеличение на 33-35 % выведения радионуклида с мочой.

При длительном гамма облучении (до 60 суток) мышей применение криопрепаратов чаги, в течение первых 30 суток увеличивало продолжительность жизни животных до 305 суток (в контроле 186 суток) и препятствовало резкому снижению лейкоцитов и развитию лейкопении, сдерживало перекисное окисление липидов крови на уровне, близком к контролю. Скорость восстановительных процессов кроветворной ткани (клетки костного мозга) была несколько выше в группах животных, получавших чагу, чем в контроле. Наблюдалась также умеренная активность синтеза белка и рост массы тела животных, что свидетельствует, по мнению авторов [93], об адаптогенном действии чаги.

Исследовано влияние чаги на развитие сопротивляемости к неблагоприятным факторам внешней среды на мышах. Испытывалось действие высокой температуры (70 °C) с длительностью пребывания животных в термостате от 13 до 20 минут [94]. Экстракт чаги вводили в желудок животным через зонд за 1 час до температурного воздействия, результаты оценивали по выживаемости мышей. В конце опыта в контроле выживало 30 % мышей и 75 % мышей, которым был предварительно введен препарат, через 48 часов выжило 7 % и 60 % мышей соответственно.

Таким образом, исследователями показано, что биологически активные вещества чаги выступают в роли биогенных стимуляторов, нормализующих физиологические функции организма [95].

Антиоксидантные свойства препаратов из чаги изучены в ряде работ. Проведена оценка антиоксидантной активности in vitro методом спонтанной и инициированной двухвалентным железом хемилюминесценцией [96]. Показано, что препарат из чаги уменьшает в 1,75 раза спонтанные свечения и в 2,5 раза – инициированную хемилюминесценцию. Аналогичный эффект наблюдается при действии ионола с концентрацией 0,01 мМ.

Криопорошок чаги сдерживал увеличение содержания малонилдиальдегида в плазме крови крыс на фоне 60-суточного лучевого воздействия и снижал уровень Р-белков в 3,5 раза по сравнению с контролем. Как известно, данный тест является высокочувствительным показателем деструктивных процессов, происходящих в организме, дестабилизации имуннобиологической защиты и нарушения гомеостаза [92].

В работе [97] проведена оценка антиоксидантных и имунномодулирующих свойств препарата из чаги – бальзама «Березка». Показано, что препарат нормализует содержание малонилдиальдегида, SH-групп, активность каталазы, супероксиддисмутазы в плазме крови крыс, нарушенных введением четыреххлористого углерода.

Было установлено [24], что полифенольный экстракт гриба также, как и экстракт, содержащий тритерпены и стерины, обладают выраженной антиоксидантной активностью, тогда как полисахаридный экстракт не проявлял этих свойств. Показана высокая антиоксидантная активность метанольного экстракта чаги [21].

Антиоксидантный эффект чаги подтвержден в клинических условиях у больных пневмонией [98] и больных с мягкой артериальной гипертензией [96] по показателям перекисного окисления липидов.

Препараты из чаги применяют в качестве симптоматического средства при различных онкологических заболеваниях в тех случаях, когда исключены хирургическое вмешательство и лучевая терапия. Они особенно эффективны в сочетании с традиционными методами лечения. Значительно улучшается самочувствие и состояние здоровья у больных раком III-IV стадии заболевания независимо от локализации опухоли при длительном (6-9 месяцев) применении препаратов. У большинства больных через 3-4 недели использования препаратов чаги уменьшаются, а через некоторое время прекращаются боли [99-103,4].

Наблюдения за органами и системами организмов у животных с привитыми опухолями и у больных раком людей, которые принимали препараты чаги, не позволили определить механизм их действия на опухоль [104-116]. Было сделано предположение, что чага, не обладая специфическим действием на опухоль, оказывает тонизирующее влияние на центральную нервную систему, а в дальнейшем, при длительном лечении, нормализует нарушенные обменные процессы в организме и тем самым оказывает тормозящее действие на рост опухоли [117]. Противоопухолевое действие чаги показано также в более поздних исследованиях [16,17,28,29].

Сухой экстракт, полученный на основе водного извлечения с применением ультразвука [7], превосходит в 1,5 раза по адаптогенной активности и в 2 раза по противоязвенному действию препарат бефунгин. Эти свойства экстракта авторы объясняют полисахаридной и флавоноидной фракциями, выделенными из экстракта [8]. Противоязвенный эффект этих фракций реализуется в основном за счёт снижения числа деструкций на слизистой оболочке желудка, а также снижения количества животных с язвами в группе. Этот экстракт эффективно тормозил образование метастазов у мышей с привитой карциномой лёгких Льюиса. Процент торможения развития метастазов при назначении бефунгина составлял 64 %, а при назначении сухого экстракта чаги – 99 %.

Поскольку иммунная система обеспечивает безопасность жизнедеятельности организма и борется с образующимися в нём раковыми клетками, рост или регрессия раковых клеток в теле хозяина зависит от его статуса пролиферации клеток и апоптоза [118]. То есть развитие раковых клеток в теле хозяина определяется экспрессией bax и bcl -2 генов [119-120]. Bax принадлежит к семейству bcl -2, продукты которых регулируют смерть клетки, тогда как продукты bcl -2 распознаются как факторы выживания для многих типов клеток, в том числе раковых [118]. Cчитается, что жизнедеятельность раковых клеток влияет на функциональный потенциал клеток иммунной системы за счёт секреции иммуноподавляющих факторов. Это изменяет иммунные ответы организма хозяина [121-123]. Появился ряд сообщений о том, что раковые клетки посылают сигналы об апоптозе для лимфоцитов [124].

В настоящее время исследователи обращают внимание на ответ иммунной системы при введении медикаментозного средства, предназначенного для борьбы с раком. Показано, что препараты, приготовленные на основе чаги, обладают выраженным имунномодулирующим действием.

Препарат «БРМ-Ц», приготовленный на основе чаги, исследовался на мышах, подвергавшихся гамма-излучению. Через месяц после облучения у животных, получавших препарат в течение 7 дней, сразу после облучения обнаруживалось увеличение содержания имуннорегуляторных клеток. Процент Т-хелперных лимфоцитов возрастал с 7,8 до 16,0, нормализовалась цитотоксическая активность клеток киллеров [125].

В исследованиях [95], проведённых на мышах, экстракт чаги обладал широким спектром имуннотропной активности в концентрациях от 1 до 100 мг/кг, стимулировал в 1,5-2,0 раза пролиферативную активность силеноцитов, трансформированных in vitro поликлональным митогеном или аллоантигеном смешанной культуры лимфоцитов селезенки аллогенных мышей. Этот препарат индуцировал дополнительное образование цитолитических лимфоцитов. Кроме того, показана возможность коррекции экстрактом чаги вторичных иммуннодефицитных состояний у мышей, вызванных введением противоопухолевого цитостатика аранозы.

В работах [25,26] установлено противовоспалительное действие метанольного и этанольного экстрактов чаги. Водный экстракт чаги сдерживает повреждение ДНК в лимфоцитах под действием перекиси водорода [27].

Ключевой работой в объяснении механизма противоракового действия препаратов на основе чаги является исследование профессора Weifa Zheng с соавторами [126]. Для испытаний приготовлен водный экстракт восьмикратной экстракцией чаги кипящей водой. Удалив растворитель, получен сухой экстракт (СЭ), содержащий меланины (56,1 %), полифенолы (19,7 %) и полисахариды (22,9 %). Применение СЭ в дозе 100 мг/кг не показало иммунотоксичности на тестируемых здоровых мышах. Трансплантация Саркомы 180 привела к снижению индекса лимфоидных органов (селезёнки и тимуса) и в особенности снижению индекса Т лимфоцитов (с 2,37 мг/г до 1,26 мг/г). Применение СЭ в концентрации 20 мг/мл показало ингибирование пролиферации клеток Саркомы 180 на 30 % и подавляет рост раковых клеток в концентрации 60 и 100 мг/мл на 40 % и 57 % соответственно. В то время как СЭ во всех исследованных концентрациях (20, 60 и 100 мг/кг) не показал цитотоксического эффекта в отношении клеток почки К293.

У мышей с трансплантированной Саркомой 180 индекс Т лимфоцитов снизился вдвое, а лимфоцитов селезёнки на 2/3 от нормального уровня. Применение СЭ в дозе 60 мг/кг привел к незначительному увеличению индекса Т лимфоцитов от 1,26 до 1,81 мг/г и существенному повышению индекса лимфоцитов селезенки с 4,13 до 11,22 мг/г (в сравнении с мышами с трансплантированной Саркомой 180, которые не принимали СЭ). Оральное применение СЕ в дозе 60 мг/кг предохраняет лимфоидный орган у мышей с Саркомой 180 не только за счёт возрастания количества лимфоцитов селезёнки, но и за счёт стимуляции пролиферации лимфоцитов. Поскольку применение СЭ в дозе 100 мг/кг в сравнении с предыдущей дозой слегка снижает накопление лимфоцитов, их пролиферацию и антираковый эффект, авторами высказано предположение о том, что снижение иммуномодулирующего эффекта с повышением концентрации СЭ обусловлено присутствием в СЭ полисахаридов, которые обычно запускают инактивацию иммунной системы организма хозяина [127]. С другой стороны, Мизуно описал 21 разновидность полисахаридов, присутствующих в природной чаге, отличающихся по структуре [128]. Из них ксилогалактоглюкан обладает выраженной иммуномодулирующей и противораковой активностью[129].

Как упоминалось ранее, рост или регрессия рака в организме хозяина в большей степени зависит от экспрессии bax и bcl-2 генов. Многие противораковые средства уничтожают раковые клетки, запуская их апоптоз как in vitro, так и in vivo через митохондрии или через «рецептор смерти» [130,131]. Запуск апоптоза в ответ на химиотерапию заключается в индукции или активации различных медиаторов, включая экспрессию или функционирование генов семейства bcl-2 [132]. Массовое производство про-апоптозных протеинов за счёт сверх высокой экспрессии гена bax приводит к регрессии рака. В противоположность этому массовая экспрессия гена bcl-2 приводит к созданию условий для роста раковых клеток [133]. У мышей с привитой Саркомой 180 не наблюдалась экспрессия антиапоптозного гена bcl-2, в то время как отмечена экспрессия проапоптозного гена bax в нормально развивающейся Саркоме 180. Масса опухоли достигла 2,19 г через 14 дней после трансплантации. Лечение мышей, имеющих Саркому 180, с помощью СЭ в дозе 20 мг/кг существенно ингибировало экспрессию гена bcl-2 и стимулировало экспрессию гена bax. Это отразилось в уменьшении веса опухоли на 27,71 %. При применении СЭ в дозе 60 мг/кг экспрессия гена bax увеличилась максимально и вес опухоли снизился на 76,86 %. При увеличении дозы СЭ до 100 мг/кг стимуляция экспрессии гена bcl -2 и снижение роста опухоли стали менее эффективны.

Ранее было установлено, что в клетках с апоптозом синтез ДНК блокируется в фазе G0-G1 [133]. Соответственно, интервенция синтеза ДНК раковых клеток становится одной из терапевтических целей противораковых лекарств. Основная терапия рака обычно применяет ДНК – повреждающие агенты, такие, как ионизирующая радиация и химиотерапевтические средства в дополнение к хирургическому вмешательству. Однако применение этих агентов также приводит к сильнейшему подавлению лимфоцитов организма хозяина в то же время, когда запускается апоптоз в раковых клетках [134]. Побочные эффекты химиотерапии очень сильно лимитируют лечебные дозы и прогнозы на выздоровление. Бурсцук с соавторами [135] показали, что водный экстракт чаги блокировал митоз клеток HeLa с возрастанием числа клеток в фазе G0-G1 in vitro. При нормальном росте клеток Саркомы 180 более 60 % клеток были в фазах G2-M, 35 % в S и только 2,02 % в G0-G1 фазе. В соответствии с их статусом активного роста только 2,06 % клеток имели стадию апоптоза. Динамика количества клеток Саркомы 180, находящихся в G0-G1 фазе, в зависимости от применённой концентрации СЭ составило: 20 мг/мл – 32,54 %, 60 мг/мл – 86,79 %, 100 мг/мл – 34,11 %. Апоптоз клеток Саркомы 180 существенно возрастал при применении СЭ и составил 22,28 %, 34,67 % и 43,36 % соответственно указанным концентрациям СЭ по сравнению с апоптозом, наблюдаемым в нормально развивающихся клетках Саркомы 180, – 2,36 %. С другой стороны, СЭ также показал защитный эффект от окислительного повреждения ДНК в лимфоцитах человека [27]. Эти результаты отчётливо демонстрируют, что СЭ селективно запускает апоптоз раковых клеток.

TNF является одним из факторов, выделяемый активированными макрофагами [136]. Адекватная доза TNF может воздействовать на рецептор, запускающий апоптоз [137]. В норме TNF-? ответ макрофагов у здоровых мышей находится на уровне ca.10 pg/ml в фильтратах культуры и достигает до 22,35 pg/ml и 68,73 pg/ml при применении СЭ в дозе 20 и 60 мг/мл соответственно. Повышение концентрации СЭ до 100 мг/мл приводит к снижению TNF-? в фильтрате культуры до 55,69 pg/ml. В сравнении – этот показатель у мышей с Саркомой 180 в фильтрате культуры составлял 4,27 pg/ml. Таким образом, одним из механизмов для запуска апоптоза раковых клеток с помощью СЭ, вероятно, является активация макрофагов и, возможно, других лимфоцитов, что приводит к увеличению выделения TNF. Следовательно, препарат из чаги (СЭ) осуществляет эффективную защиту лимфоцитов от индуцированного раковой опухолью их апоптоза и имеет значительный потенциал для индуцирования апоптоза в раковых клетках. Его применение приводит к активации клеток иммунной системы и усилению ими защиты организма в отношении онкогенеза.

Таким образом, показано, что на действие извлечений и препаратов чаги на организм животных и человека влияет способ их получения. В основе лечебных свойств препаратов чаги лежат – их действие на центральную нервную и иммунную системы, антиоксидантные свойства и активация ферментов крови. Это объясняет их высокую эффективность применения в качестве антитоксических, радиопротекторных и адаптогенных средств, а также использование для профилактики и лечения предраковых и раковых заболеваний.

Химический состав чаги

Наросты чаги в продольном сечении имеют три слоя, отличающихся по цвету. Верхний слой черный, его в иностранной литературе ряд авторов называет его sclerotium (ST) – плотная часть, затем идёт плотный слой темно-коричневого цвета, его называют fruiting body (FB) – плодовое тело, и далее рыхлый светлокоричневый, непосредственно прилегающий к древесине. При заготовке для производственной переработки и поступления в аптечную сеть используются первые два слоя.

Элементный состав чаги. Количество зольных элементов в чаге составляет в среднем 12-15 %, что в 2-3 раза больше, чем в многолетних трутовых грибах и в 7-13 раз больше, чем в древесине и коре березы [55]. Резкое повышение содержания зольных элементов в чаге автор связывает с усиленным притоком древесных соков из корневой системы, а также – из кроны к камбию, окружающему пораженный чагой участок дерева. Определён состав катионов: SiO

1,73 %, Fe

O

– 0,03 %, Al

O

– 0,17 %, CaO – 1,88 %, MgO – 2,45 %, Na

O+ K

O -52,30 %, ZnO -0,06 %, CuO – 0,005 %, Mn

O

-1,24 %, и анионов: SO