Лечение сахарного диабета стволовыми клетками. Серия: Доказательная медицина

3. Клеточная терапия может быть использована для ускорения процесса перехода в состояние УММ.

4. Для лечения СД 1-го типа используют разные клеточные культуры. Разные по способу получения материала, по принципу действия.

5. Клеточная терапия не применяется в моноварианте.

6. При применении клеточной терапии обязательным является выполнение специальных процедур по регулированию экспрессии генов каждые девять месяцев.

7. Главные источники МСК (мезенхимальных стволовых клеток) – костный мозг, пуповинная кровь, пупочный канатик и жировая ткань человека.

8. Основной источник ГСК (гемопоэтических стволовых клеток) – периферическая кровь.

9. Если у родителей есть возможность заготовить и хранить СК пуповинной крови или пупочного канатика – прекрасно. Но если нет, отчаиваться не стоит. Доступны два других пути, которые идеально подходят для лечения диабета 1-го типа.

Безопасность: это безопасно, если пациент предварительно тщательно обследован. Проведены десятки исследований с отслеживанием в течение длительного времени: никаких осложнений, появления спонтанных опухолей не зарегистрировано. Слухи и сказки про гибель народных артистов от стволовых клеток – неправда. Как ни странно, но нет ни одного доказанного случая!

Трансплантация гемопоэтических клеток изначально, с 1965 года, начала применяться для терапии онкологических заболеваний, и в данной области уже пройдено огромное количество клинических испытаний, в том числе с отдаленными многолетними наблюдениями за пациентами, доказавшими их безопасность и эффективность. По мезенхимальным стволовым клеткам первые клинические применения были еще в 1988 году, и в последние годы также было завершено много клинических испытаний (по артритам, болезни Крона, рассеянному склерозу, кардиологическим заболеваниям и многим другим), показавших безопасность и эффективность данной методики.

В настоящее время одно из самых важных и основных направлений терапии стволовыми клетками в мире является терапия рака. Уже пройдены клинические испытания по лечению стволовыми клетками злокачественных опухолей головного мозга (глиобластомы) и ретинобластомы у детей, идут успешные испытания по лечению рака молочной железы, печени и многих других онкологий с применением мезенхимальных стволовых клеток, показавшие высокую их эффективность для подавления опухолевого процесса. В США при лечении рака 3-й – 4-й стадий широко применяется сочетание высокодозной лучевой и химиотерапии с последующим внутривенным многократным введением мезенхимальных стволовых клеток для восстановления внутренних органов, которые вместе с клетками опухоли повреждаются химио- и лучевой терапией.

Обращает на себя внимание клиническое исследование (Hernigou P., Homma Y.), доказавшее, что после лечения стволовыми клетками из костного мозга 1 873 пациентов на протяжении с 1990 по 2006 годы (отслежены по 2011 год) нет роста онкологии после введения стволовых клеток. При терапии стволовыми клетками рак не обнаружен ни у одного пациента. Это уже не первое клиническое исследование, показывающее, что риск рака среди людей, получавших лечение стволовыми клетками, ниже, чем в целом в популяции.

Результаты I и II фаз клинических испытаний мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) при старческой дряхлости показали, что применение ММСК безопасно и приводит к значительному улучшению физической работоспособности и воспалительных биомаркеров:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30498696?

fbclid=IwAR01lExmj0Hf-qhylH44BGs1kGjlr-

YFNtTc7NveE6nc22wel8qF1Tgt04Y

Гемопоэтические стволовые клетки

ГСК обеспечивают регенерацию клеточных компонентов крови и иммунной системы (эритроцитов, тромбоцитов, лимфоцитов, моноцитов и др.). Постоянный пул этих клеток сохраняется на протяжении всей жизни человека благодаря их высокому пролиферативному потенциалу. Источники ГСК – костный мозг, периферическая кровь.

В настоящее время появился более совершенный способ получения стволовых клеток у донора – из периферической крови.

Основные принципы выполнения процедуры мобилизации и забора стволовых клеток из периферической крови: в крови здорового человека количество циркулирующих предшественников гемопоэза невелико, поэтому требуется проводить мобилизацию периферических стволовых клеток доноров с помощью определенных препаратов (например, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора) в течение пяти дней.

Забор периферических стволовых клеток крови осуществляется методом лейкоцитофереза. Во время этой процедуры кровь откачивается специальным насосом из локтевой вены, проходит через специальный аппарат – клеточный сепаратор и возвращается донору. Во время каждого прохождения через аппарат отбирается только небольшое количество стволовых клеток, поэтому таких циклов совершается много. Всего за процедуру через сепаратор проходит 10 – 15 литров крови, из которых в аппарате остается всего 50 – 200 мл. Остальные компоненты крови возвращаются донору.

Стволовые кроветворные клетки определяют методом проточной цитофлюориметрии.

Накапливается определенное количество СК, а затем вводится больному.

Сама трансплантация ГСК по процедуре напоминает обычное переливание крови, за которым следует период ожидания приживления пересаженных стволовых гемопоэтических клеток. Происходит миграция клеток-предшественников гемопоэза в костномозговое пространство и установление связей со стромальным компонентом.

К настоящему времени достигнуты определенные успехи наращивания биомассы ГСК в условиях культуры. Для изучения условий культивирования стволовых клеток из различных источников (костный мозг, мобилизованная периферическая кровь) используются различные цитокины (факторы роста и ингибиторы дифференцировки клеток) и их комбинации. Идентификация ГСК осуществляется по их маркерам – CD14, CD34, CD45 и CD68.

ГСК костного мозга здоровых людей применяются с 1970-х годов для восстановления кроветворения у облученных людей и больных лейкозами: аллогенная трансплантация ГСК костного мозга и периферической крови (в результате мобилизации ГСК из костного мозга).

В настоящее время накоплен большой опыт лечения различных форм лейкозов, апластических анемий и ряда других тяжелых заболеваний крови с помощью трансплантации костного мозга. Она позволяет во многих случаях добиться радикального излечения больных.

Начиная с 1990-х годов ГСК человека применяются также для устойчивого переноса генов, дефектных у реципиента костного мозга, например имеющих врожденный иммунодефицит. Однако осуществление трансплантации костного мозга связано со значительными трудностями в подборе подходящего донора из международных регистров.

Спектр возможного применения ГСК неуклонно расширяется. В последние несколько лет ГСК стали использовать и для лечения негематологических болезней. Это заболевания, связанные, как правило, с нарушением функционирования иммунной системы: ревматоидный артрит, системная красная волчанка, болезнь Крона, рассеянный склероз, устойчивые к лечению артриты. Другая область применения ГСК – онкология. Появились данные о возможности лечения рака груди и почки.

Разрабатываются протоколы применения ГСК для лечения болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, сахарного диабета 1-го типа, инфаркта миокарда, апластической анемии.

Интенсивная иммуносупрессивная терапия с последующей трансплантацией аутологичных стволовых кроветворных клеток ведет к повышению иммунологической толерантности и таким образом увеличивает продукцию собственного инсулина при сахарном диабете 1-го типа. Целью исследования явилась оценка следующих этапов аутологичной трансплантации стволовых клеток при сахарном диабете 1-го типа: мобилизация, инфузия гемопоэтических стволовых клеток и восстановление уровня нейтрофилов.

В период с января 2004-го по август 2006-го в исследование было включено 15 больных (12 мужчин и 3 женщины) с сахарным диабетом 1-го типа (менее шести недель после установления диагноза). Медиана возраста составила 17 лет (от 14 до 31 года).

Полученные данные свидетельствуют, что мобилизация гемопоэтических стволовых клеток у больных сахарным диабетом 1-го типа является эффективной. Инфузия периферических стволовых кроветворных клеток безопасна, доля возникающих побочных реакций мала. Восстановление уровня гранулоцитов происходит в относительно ранние сроки. Из 15 пациентов, находящихся под наблюдением после трансплантации стволовых клеток, у одного не было эффекта, 12 удалось отказаться от инсулина после начала кондиционирования, у двух была снижена доза инсулина. Один из них прекратил введение инсулина через год после трансплантации стволовых клеток.

Многие удивятся, но ГСК производит не только костный мозг! Это лишний раз подчеркивает важность кишечника и микробиоты. Долгое время единственным местом, где в человеческом организме производятся новые клетки крови, считался костный мозг, однако открытие американских ученых говорит о том, что наш кишечник также содержит гемопоэтические стволовые клетки, которые играют роль ранних предшественников клеток крови. Доподлинно не известно, сколько именно крови продуцирует ткань кишечника, но ученые предполагают, что показатель может доходить до 10% всего объема крови в организме:

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1934590918305435?via%3Dihub&fbclid=IwAR1fHKTOo1H0QfLufDbDL44_6Mhs3IV3YrM5VWKIaV8coRLpdvryS9jqg70 (https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1934590918305435?via%3Dihub&fbclid=IwAR1fHKTOo1H0QfLufDbDL44_6Mhs3IV3YrM5VWKIaV8coRLpdvryS9jqg70)

Аутологичные гемопоэтические стволовые клетки, мобилизованные из периферической крови

Как это происходит в реальности, любой может посмотреть на моем личном примере, где мне проводят эту процедуру. Я ввожу CD 34 клетки по специальному алгоритму с целью ревитализации каждые 3 – 5 лет по 20 млн ЕД. Видео на странице:

http://equilibr.ru (http://equilibr.ru/)

Процедура проводится только в стационарных условиях после выполнения серьезного протокола исследований в течение трех суток. Это самый строгий протокол обследования в мире для исключения онкопатологии, состоит из двух модифицированных, более простых, принятых в Америке и Швейцарии.

Общая госпитализация на семь дней. Средняя стоимость – около 900 000 рублей (по состоянию на январь 2019 года). Хранение в государственном криохранилище – 100 долларов в месяц. Возрастное ограничение – старше 18 лет.

Аутологичные мезенхимальные стволовые клетки (МСК), мобилизованные из жировой ткани

Процедура выполняется амбулаторно в течение двух часов (http://equilibr.ru/msc.html (http://equilibr.ru/msc.html)). Исключение составляет необходимость наращивания культуры при невыраженном жировом слое (около трех-четырех месяцев). Возрастных ограничений нет. Забор проводится под местной анестезией совершенно безболезненно. Алгоритм введения: раз в месяц, четыре подряд, возможно введение раз в три месяца (четыре введения), это зависит от конкретной программы.

СК жировой ткани по рекомендации Международного общества по применению технологий пересадки мезенхимальных стволовых клеток, полученных из жировой ткани принято называть ADSCs (Adipose-Derived Stem Cells) или стромально-васкулярной фракцией, которая включает в себя:

• васкулярные (сосудистые) клетки: эндотелиальные, перициты, гладкомышечные, циркулирующие клетки крови – эритроциты, моноциты, макрофаги, Т-лимфоциты, преадипоциты;

• фибробластоподобные клетки, которые располагаются вдоль капилляров. Их называют мультипотентными мезенхимальными или стромальными СК. Мезенхимальные клетки жировой ткани обладают высокой пластичностью и способны превращаться не только в хондробласты – хрящевую ткань и в остеобласты – костную ткань, но и в фибробласты – рыхлую соединительную ткань, строму, в адипоциты – жировую ткань, в миоциты – мышечную ткань, в кардиомиоциты – сердечную мышечную ткань, в нейроны – нервную ткань, в гепатоциты – ткань печени, в эндотелиальные клетки – обеспечивающие рост артериальных, венозных и лимфатических сосудов, и т. д.

Особый интерес представляют иммуносупрессивные свойства МСК и соответствующее применение МСК для лечения иммунопатологических состояний, причем не только таких тяжелых, как реакция «трансплантат против хозяина», рассеянный склероз, но и таких часто встречающихся, как, например, аллергические реакции различной этиологии и тяжести. Известно, что мезенхимальные стволовые клетки (МСК) способны оказывать подавляющее действие на функциональную активность T-лимфоцитов, B-лимфоцитов, дендритных клеток и естественных киллеров (NK), причем эта система работает по принципу обратных связей. Все это делает МСК средством лечения многих аутоиммунных заболеваний и прежде всего СД 1-го типа у взрослых и детей. Очень важной особенностью МСК является их низкая иммуногенность и, более того, способность подавлять иммунный ответ организма, что крайне важно при осуществлении различного рода аллогенных трансплантаций.

Жировая ткань является более легкодоступным биологическим материалом по сравнению с костным мозгом – основным источником МСК. МСК, полученные из жировой ткани, лучше подходят для применения в травматологии и ортопедии, поскольку более эффективно дифференцируются в клетки костной ткани. Кроме того, МСК жировой ткани могут стимулировать рост сосудов благодаря секреции фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), что обеспечивает эффективность их применения при таких заболеваниях, как ишемия нижних конечностей.

ЛИТЕРАТУРА:

Бозо И. Я. Применение гемопоэтических стволовых клеток для лечения СД 1-го типа. Гены и клетки, 2008, т. 3, №3.

K. Рrata, G. de Santis, M. C. Oliveira et al. Mobilisation, collection, infusion and granulocyte recovery of PBSC in early onset type 1 diabetes mellitus submitted to autologous haematopoietic cell transplantation – update of outcome results. Bone Marrow Transplantation, v. 39, supl. 1, p. 19.

Стволовые клетки пуповинной крови (пупочного кантика)